Polares Adsorberpolymer für die Festphasenextraktion
Spheropor H ist ein hochvernetztes, poröses Copolymer von Divinylbenzen und Vinylimidazol. Aufgrund seiner Polarität zeigt es eine hydrophil-hydrophobe Balance und ist besser wasserbenetzbar als rein hydrophobe Materialien. Seine kugelfömigen Partikel, die hohe spezifische Oberfläche und ausgewogene Porengrößenverteilung machen es zu einem ausgezeichneten Sorbens für die Festphasenextraktion. Hohe Wiederfindungsraten bei unkomplizierten Extraktionsprotokollen sind ideale Voraussetzungen für die automatisierte Hochdurchsatz-SPE.
Typische Eigenschaften
| Eigenschaft | Methode | Wert |
| Kornform | Mikroskopie | kugelförmig |
| Korngröße | Siebanalyse | 45–100 µm |
| mittlerer Korndurchmesser | Lasergranulometer | 60 µm |
| Spezifische Oberfläche | N2-Adsorption BET | 680 m²/g |
| MittlererPorendurchmesser | N2-Adsorption BET | 90 Å |
Durchführung der Festphasenextraktion / Bestimmung von Wiederfindungsraten
Als Beispiel-Analyten werden folgende Substanzen verwendet: Acetaminophen, Procainamid, Ranitidin, Koffein, Toluamid, Toluidin, 2,7-Dihydronaphthalen, Propranolol, Dipropylphthalat und Doxepin. Jeder Analyt wird mit einer Konzentration von 10 µg/ml in einem Gemisch von 50 Vol% Methanol und 50 Vol% 20
mM Phosphatpuffer pH = 7 gelöst.
Das folgende Protokoll simuliert die Arbeitsbedingungen in Hochdurchsatzautomaten. Das Sorbensbett wird mit Hilfe von Vakuum wiederholt trocken abgesaugt. Als Puffer wird 20 mmol Phosphatpuffer pH = 7 eingesetzt. Zur Beladung werden Lösungen der Analyten in diesem Puffer mit einer Konzentration von 10 µg/ml verwendet. Alternativ können Lösungen von Analytgemischen verwendet werden.
| 60-mg-Kartuschen |
200-mg-Kartuschen |
|
|---|---|---|
| Konditionieren | 1 ml Methanol | 2 ml Methanol |
| Äquilibrieren | 1 ml Wasser | 2 ml Wasser |
| Trockenlaufen | 2 min unter vollem Vakuum | 2 min unter vollem Vakuum |
| Beladen | 1 ml Analytlösung | 2–4 ml Analytlösung |
| Waschen | 1 ml Puffer | 2–4 ml Puffer |
| Trockenlaufen | 2 min unter vollem Vakuum | 2 min unter vollem Vakuum |
| Eluieren | 1 ml Methanol in 2-ml-Messkolben sammeln | 2,5 ml Methanol in 5-ml-Messkolben sammeln |
| Vorbereitung für die HPLC | Eluat im 2-ml-Messkolben mit Puffer auffüllen. | Eluat im 5-ml-Messkolben mit Puffer auffüllen. |
| HPLC-Analyse |
Das Auffüllen der Messkolben erfolgt unter der Annahme, daß dabei wieder eine Analytlösung in 50 Vol% Methanol und 50 Vol% Puffer entsteht (wie bei der Kalibrierung verwendet). Dies ist Voraussetzung zum Erreichen konstanter Retentionszeiten. Die HPLC-Analyse der aufgefüllten Eluate erfolgt unter den gleichen Bedingungen wie die Kalibrierung.
Das Auffangen der Eluate in Messkolben und anschließende Auffüllen ermöglicht darüber hinaus die genauere Bestimmung der Wiederfindungsrate von leicht flüchtigen Analyten wie Dipropylphthalat oder Toluidin, welche bei einem Eindampfungsschritt verdampfen und niedrige Wiederfindungsraten vortäuschen.
Typische Wiederfindungsraten
